福瑞鲤IGF3基因的克隆及在不同生长速度性腺中的表达模式分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1研究意义鱼类胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors, igfs)是进化上相当保守的多肽, 能促进组织细胞的增殖、分化和凋亡, 对鱼类的生长和发育有重要的调节作用[1]。

目前大多数的研究结果是关于igf-1的，而igf-2却很少被提及，关于igf-3的研究更少。

igf-3基因目前只在鱼体内发现，而且只出现在卵巢中的颗粒细胞和体细胞、精巢中的间质细胞，对于其功能的研究才刚刚起步。

2. 研究的基本内容和问题

1 研究目标、内容（1）克隆得到福瑞鲤IGF3基因全场cDNA序列，分析其结构和生物学特征；（2）通过荧光定量RT-qPCR和半定量PCR分析IGF3基因在不同生长福瑞鲤性腺中的表达模式，进而分析其在鲤鱼性腺发育中的作用。

2 拟解决的关键问题（1）IGF3基因的分子克隆；（2）IGF3基因在不同生长速度福瑞鲤性腺中的表达模式及在性腺发于中的作用。

3. 研究的方法与方案

1 研究方案福瑞鲤性腺组织总rna提取（rneasy protect mini kit, takara）→反转录为cdna模板（primescript tm real-time pcr kit, takara）→igf3基因简并引物设计→获取igf3基因片段→5和3-cdna 片段扩增（smarttm race cdna amplification kit, takara）→pcr 产物的克隆测序→序列的拼接及组装→序列分析。

不同生长速度福瑞鲤性腺rna 提取→反转录为cdna模板→real-time rt-pcr（primescript extaq rt-pcr kit, takara）→igf3 mrna 转录本表达量分析。

2 技术路线引物设计→福瑞鲤性腺rna提取→race技术获得igf3基因cdna全长→rt-qpcr和半定量pcr技术进行性腺组织表达分析→福瑞鲤igf3基因在性腺发育中的作用分析3 可行性分析本项目指导老师和团队成员长期从事鱼类遗传育种、发育生物学及分子生物学研究，熟练掌握了分子生物学实验、发育生物学等相关技术手段，科研团队实力雄厚。

4. 研究创新点

目前大多数的研究结果是关于igf-1的，而igf-2却很少被提及，关于igf-3的研究更少。

igf-3基因目前只在鱼体内发现，而且只出现在卵巢中的颗粒细胞和体细胞、精巢中的间质细胞，对于其功能的研究才刚刚起步。

因此，克隆福瑞鲤igf3基因并分析其在性腺发育中的作用，在该领域尚属首次。

5. 研究计划与进展

2015年9月2014年11月 查阅文献，确定实验计划及方案；2015年12月2016年1月 开始实验并随时记录数据；2016年2月2016年3月 实验室分析数据；2016年3月2016年5月 根据数据分析结果并撰写论文。