1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题意义:本课题利用sscp技术来检测黄鳝线粒体的异质性,可以验证sscp技术应用于线粒体异质性检测的可行性以及其效果如何。
国内外研究概况:线粒体dna是裸露的环性分子,缺乏组蛋白的保护,而且由于呼吸链经常产生活性氧类物质对线粒体dna也有一定的突变效应,所以线粒体具有较高的突变率和序列的多样性。
mtdna异质性一般指同一细胞或同一个体内存在着两个不同mtdna亚群,它包括点异质型和长度异质。
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2. 研究的基本内容和问题
在本研究中,作者选择了黄鳝细胞色素C基因,16srDNA和D-loop三个序列中部分片段设计了6对引物,使用不对称PCR扩增出相应单链,对其五个组织(肝,肾,肌肉,血液和卵)的线粒体异质性进行了研究,探讨SSCP在检测线粒体异质性的应用价值。
3. 研究的方法与方案
研究方法:1.在淡水中心渔场取一龄黄鳝。
2.黄鳝分别提取10个不同组织的dna样品。
3.不对称pcr扩增出相应单链。
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4. 研究创新点
SSCP技术多用于检测基因突变和未知基因突变筛查,在线粒体异质性的研究上还没有报导,所以本实验的研究可以说是一次新的探索。
5. 研究计划与进展
2015.9-2015.12;取样,提取黄鳝DNA,PCR扩增,PAGE,染色,数据统计。
2016.1-2016.4;整理材料,撰写论文
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