猪耳皮肤成纤维细胞库的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

（一）课题意义 江苏省地方猪种资源十分丰富，在风味、繁殖力等特性上具有优势。

由于市场追求体增重、日增重、瘦肉率等商业化目的，引进大量外来品种，致使地方猪种资源的锐减。

但我国地方猪种有着其优良的特性，在培育新品种上有着巨大的潜力和广阔的利用前景。

2. 研究的基本内容和问题

（一）研究目标通过对不同性别的江苏地方猪种耳成纤维细胞的培养，来探讨老猪保种的可能性。

以及尝试用断尾后的尾部的成纤维细胞或骨髓细胞进行培养，建立体细胞库。

（二）研究内容通过采集的不同性别的年老地方猪种的耳部组织，处理后进行原代培养以及传代培养，根据其在体外培养的成功率来探讨老猪的保种价值。

3. 研究的方法与方案

（一）实验方案（1）成纤维细胞的培养1.取材采集新鲜的老年猪耳组织或断尾后的幼猪尾巴，尽量挑选猪耳组织上血管较细少的部位，用乙醇擦拭消毒，用耳钳剪下一小块猪耳组织，将组织放入pbs（含有50ug/ml卡那霉素、100iu/ml青霉素和100ug/ml链霉素）中，立即带回实验室。

2.成纤维细胞的体外培养 在超净工作台上，将猪组织块浸入75%乙醇清洗，再放入含双抗的pbs中清洗，然后置于无菌培养皿中，用眼科剪和手术刀除去毛发及皮下筋膜组织和多余的皮下脂肪组织，剪碎至糊状，洗去毛囊，分别用组织块培养法和胰蛋白消化法做原代培养成纤维细胞。

待细胞汇合90%时左右进行传代培养,并进行冻存。

4. 研究创新点

特色或创新之处（1）研究通过对年龄较老的猪耳皮肤成纤维细胞培养来进行保种的可能性。

（2）尝试用仔猪断尾后的尾部细胞来进行细胞培养，探究其能否用于保种。

（3）对采集耳部组织的器械耳钳进一步改装，提高采集的耳部组织质量。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2016年7月- 2016年10月 查阅相关文献资料，制定具体研究方案。

2017年2月- 2017年3月 在实验室学习具体操作方法，熟悉实验仪器设备。

2017年3月- 2017年4月 开展实验，记录数据，进行初步分析。