鲤鱼SAA基因序列分析、原核表达及蛋白纯化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1 研究意义鲤鱼是世界性养殖鱼类，其四倍化的染色体(2n=100)使鲤鱼具有丰富的遗传多样性，仅我国就存在很多的地理种群，比如荷包红鲤、兴国红鲤、黄河鲤、镜鲤、元江鲤、长鳍鲤、黑龙江鲤等，人工培育的品种也很多，如芙蓉鲤、建鲤、松浦镜鲤、超级鲤、福瑞鲤等。

随着生活水平的提高，大众对肉质有了更高的要求，口感、营养为消费者格外重视。

femandez等人发现一定范围内，肌肉脂肪的含量越高肉的口感就越好［1］。

2. 研究的基本内容和问题

1 研究目标通过氨基酸序列比对分析构建系统发育树，得到鲤鱼saa与其它物种的同源性。

通过原核表达得到目的蛋白，纯化之后做western blot、蛋白浓缩，并测出蛋白的浓度，为后续做蛋白功能等实验做准备。

2 研究内容本课题以草食性鱼类鲤鱼为研究对象，通过分子生物学手段研究鲤鱼saa对脂肪分解、抗菌作用的影响，主要包括以下4个内容：2.1 鲤鱼saa的氨基酸序列及其特性根据saa的cdna序列，用editseq软件分析其氨基酸序列。

3. 研究的方法与方案

1 研究方法1.1 saa氨基酸序列分析根据克隆的cdna测序结果，用editseq软件得到氨基酸序列。

从ncbi中查找脊椎动物的saa氨基酸序列，包括人（homo sapiens）、虹鳟（oncorhynchus mykiss）、草鱼（ctenopharyngodon idellus）、斑马鱼（barchydanio rerio var）、大西洋鲑（）金鱼（carassius auratus）、鼠（mouse）、白鲢（hypophthalmichthys molitrix）、鸡（gallus domestiaus）、大黄鱼（larimichthys crocea）。

通过megalign软件将它们与本课题组测序获得的两个鲤鱼saa氨基酸序列进行比对，根据结果构建系统发育树。

4. 研究创新点

saa在哺乳动物中的研究比较深入，已经证实了，在多种疾病发生过程和免疫功能方面有重要影响。

但是saa在水产方面的研究仍在起步阶段，对于本课题研究对象鲤鱼saa对脂解的作用，相关研究尚未见诸报道，在免疫反应中的作用液罕有报道。

所以本课题研究saa对鲤鱼促进脂解相关基因的表达情况是一大创新，还能对saa的抗菌作用进行验证。

5. 研究计划与进展

1 研究计划2015.08-2015.12，前期准备与预实验。

包括相关基因序列查寻、引物合成、t克隆、原核表达载体的构建、原核表达条件的优化、蛋白的纯化方法等；2016.02-2015.04，获得纯化的蛋白、蛋白浓度的测定；2016.04-2015.06，完成数据处理分析，完成论文撰写。

2 预期进展（1）确定鲤鱼两种saa对脂肪分解的影响，对比两种基因的影响效果。