海藻多糖降解酶的挖掘及克隆开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述

1. 海藻多糖和海藻多糖裂解酶

海洋生物学正不断发展，人们对海藻多糖的关注也日益加强。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

本课题目的是以海藻酸钠为唯一碳源的培养基，对海边土壤中的微生物进行筛选和分离，获得海藻酸钠裂解酶高产菌株。

以海藻酸钠为唯一碳源，将收集到的土壤样品与灭菌水混合均匀后吸取适量菌液接种于培养基中富集；然后将富集的菌液按照一定浓度梯度稀释涂布到初筛培养基平板上培养，观察平板上的菌落形态，挑取生长状况较好的单菌落平板划线，进一步纯化；随后筛选出能在海藻酸钠唯一碳源培养基生长且形成透明圈的菌株。根据透明圈与菌落直径比值，初步判断菌株降解褐藻胶的能力。挑选透明圈与菌落直径比值较大的菌株，接入复筛培养基中培养。将发酵液离心，取上清液利用DNS 法测定酶活，从而筛选出酶活性较高的菌种。将菌株的16S rRNA进行PCR扩增，接着对比NCBI数据库，确定菌株的种属信息，以酶活力最高的分泌菌株作为下一步的研究材料。然后对产酶条件进行优化。对裂解酶基因进行异源表达，构建含褐藻胶基因的工程菌，对诱导表达的褐藻胶裂解酶进行纯化。