PopW互作蛋白的筛选与鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义：本次对popw互作蛋白的筛选研究,对于进一步解释popw蛋白的抗病机理有重要意义,如研究其代谢通路、调控网络等。

国内外研究概况：①popw蛋白包括n-末端159个氨基酸的harpin结构和c-末端207个氨基酸组成的果胶酶裂解结构域;它所激发的过敏反应依靠n-末端的结构域。

②经过亚细胞定位、质壁分离、过敏性反应等实验研究发现,popw是无活性的果胶酶同源物,锚定在植物细胞壁上,其全长及其n-末端harpin结构域都可以引起hr,通过三型泌出系统分泌到胞外。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：找到popw的互作蛋白。

研究内容：①分析主要与popw蛋白起互作的结构域。

②通过番茄文库筛选popw的互作蛋白。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1.酵母双杂交法筛选番茄文库前期用popw蛋白对番茄苗进行处理,3h后收集叶片,共5g,用于构建文库。

文库构建的基本步骤：提取番茄叶片rna、分离纯化mrna、初级文库构建、次级文库构建、检测文库质量（主要包括库容量、片段插入长度等指标）。

其中文库构建的载体为pgade-t7,具体方法参见clotech matelibrary construct system。

4. 研究创新点

PopW是是实验室自主开发的一种新型harpin蛋白，此实验是对其的研究。

互作蛋白的应用还不广泛。

5. 研究计划与进展

2017年12月24日至2018年1月20日了解并学习酵母双杂交相关的实验技术。

文库转化与筛选。

2018年2月26日至4月26日鉴定并进一步确定popw的互作蛋白。