江苏境内猪轮状病毒的流行病学调查开题报告

 2023-02-15 10:29:58

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

猪轮状病毒病是由猪轮状病毒(porcine rotaviruses,prvs)引起的猪的急性肠道传染病[1-2]。

prvs 是引起仔猪腹泻的主要病原之一。

1~4 周龄仔猪的发病率超过 80%,死亡率为 7%~20%[3-5]。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:利用轮状病毒基因组由11个rna片段组成的特点,进行病毒的基因测序,调查轮状病毒的流行情况,确定变异毒株的全长基因,为防预提供依据。

研究内容:参考文献根据prv具有11个rna片段设计引物。

对病料进行prv检测。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:参考文献根据prv11个rna片段设计引物。

对实验室的临床病料做prv检测,阳性病料扩增prv vp4片段、vp7片段基因,琼脂糖凝胶电泳,将目的条带亮的胶块切下送去测序公司测序,目的条带较暗的胶块做凝胶回收,把目的片段与t载体相连,然后转入dh5α,大量培养后提质粒,进行测序。

利用相关软件分析比对测序所得序列,并对有缺失、插入或改变序列的毒株进行全基因组测序技术路线:详情见附件实验方案:1.1 临床病料检测从江苏省,华东地区规模化猪场获取病料,对病料进行prv检测,获取阳性病料,并测得阳性率。

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4. 研究创新点

运用RT-PCR技术,扩增合成目的片段,该技术用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列,后通过测定猪轮状病毒的全长基因序列来及时发现PRV流行毒株的变异情况,为该病的防控和疫苗候选株的筛选提供理论依据。

5. 研究计划与进展

研究计划:在整个实习过程中,分步进行基因测序,找出引物的最适温度,确定11个蛋白的基因片段大小,再进行拼接来确定轮状病毒的基因全长,时间充裕的话,能够另外测出其他几个阳性样品的部分基因序列。

预期进展:在实习期间能够完整的测出一株轮状病毒的基因全长序列.

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