猪伪狂犬病毒gD基因的原核表达及蛋白纯化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

伪狂犬病( pseudorabies，pr) 是由伪狂犬病病毒 ( pseudorabies virus，prv) 引起的危害多种动物的一种以发热、奇痒和以脑脊髓炎为代表的神经症状的急性传染病[1]。

猪是prv的主要贮存宿主及疫源动物。

猪伪狂犬病常引起妊娠母猪繁殖功能障碍和初生仔猪的神经症状。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：构建伪狂犬病毒gd基因的重组表达载体pet-32a/gd，对重组蛋白进行诱导及纯化，为获得单克隆抗体奠定基础。

研究内容：参照genebank收录的prv gd基因，设计及合成引物，扩增目的基因并纯化与回收pcr产物。

将目的片段与载体片段pgem-t easy vector连接构建重组质粒，转化至dh5α感受态细胞，制备重组质粒。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1、设计与合成伪狂犬病毒gd基因的引物，扩增目的片段，完成pcr产物的纯化与回收。

2、制备pgem-t/gd重组质粒,进行酶切及测序鉴定。

3、制备pet-32a/gd重组表达载体，进行酶切及测序鉴定。

4. 研究创新点

选取伪狂犬病毒gD基因作为目的基因，可为以后深入开展gD基因的功能研究以及单抗的研制奠定基础。

5. 研究计划与进展

第1-2周：进行文献的搜集与阅读工作，为后续的工作提供坚实的知识基础。

第3-15周：设计试验技术路线；完成试验进度；思考试验过程中出现的问题。

第16-18周：总结试验结果，撰写论文。