1. 研究目的与意义
核糖-5-磷酸异构酶(ribose-5-phosphate isomerase，rpi)是一种醛糖酮糖异构酶，在磷酸戊糖途径中可逆地催化d-核糖-5-磷酸和d-核酮糖-5-磷酸的异构反应。
rpi家族包括两个亚家族，rpia(ribose-5-phosphate isomerase，rpia)和rpib(ribose-5-phosphate isomerase，rpib)。
在布鲁氏菌和大肠杆菌中，rpib可分别催化d-赤藓糖--4-磷酸转化为d-赤藓酮糖-4-磷酸和d-阿洛糖-6-磷酸转化为d-阿洛酮糖-6-磷酸，显示出比rpia更广的底物范围。
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2. 研究内容和预期目标
一、制备固定化磷酸-5-核糖异构酶，探索固定材料量与酶量之比；
二、探索固定化单酶的最适底物浓度及催化条件，包括最适底物浓度、最适pH、最适反应温度等条件的探索；
三、绘制木糖、蛋白质标准曲线；
四、通过高效液相色谱仪法测定产物含量，考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。
3. 研究的方法与步骤
1实验准备
1.1材料
核糖-5-磷酸异构酶b、pda、蛋白胨、酵母膏、k2hpo4、kh2po4、nacl、kcl、木糖等。
1.2培养基
lb培养基(g/l)：酵母粉5、蛋白胨10、nacl 10，1m naoh调ph至7.0。
tb培养基(g/l)：酵母粉24、蛋白胨20、k2hpo43h2o 16g、k2h2po4 2.31g、甘油5g，1m naoh调ph至7.0。
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4. 参考文献
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5. 计划与进度安排
1）2024-03-01～2024-03-12：查阅资料撰写开题报告；
2）2024-03-12～2024-03-18：培养大肠杆菌，纯化核糖-5-磷酸异构酶，制备固定化酶；
3）2024-03-19～2024-04-15：探索固定化单酶的最适底物浓度及催化条件；
4）2024-04-16～2024-04-22：通过高效液相色谱测定还原糖含量，考马斯亮蓝法测蛋白质含量；
5）2024-04-23～2024-05-17：绘制还原糖、蛋白质标准曲线。
6）2024-05-18～2024-06-01：分析实验结果，整理实验数据。
7）2024-06-03～：撰写论文，英文翻译，修改补充论文，准备答辩。
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