白首乌多糖的提取纯化及对鸡免疫细胞增殖的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

白首乌为耳叶牛皮消（cynanchum auriculatum royle ex wight）、戟叶牛皮消（cynanchum bungei decne.）或隔山消（cynanchum wilfordii）的块根，是中国传统的食、药、美容兼用植物。

白首乌味甘、苦 、性微温，含有多种营养成分及生物活性物质，具有补肝肾、强筋骨、益精血、健脾消食、解毒疗疮等功效。

研究表明，白首乌有效部分和生理成分具有多种保健功效，具有提高动物特异以及非特异性免疫效果、降低胆固醇含量、清除人体内自由基、抑制肿瘤生长扩散、有效降低心肌耗氧量等作用。

2. 研究的基本内容和问题

1 研究目标：1.1 获得白首乌去蛋白分级多糖；1.2 研究白首乌去蛋白多糖的体外免疫调节作用。

2 研究内容：2.1 白首乌分级多糖的提取、纯化：采用水煎煮、酶解法和醇沉法提取白首乌粗多糖；三氯乙酸法去除蛋白质、透析法去除小分子物质；硫酸苯酚法、考马斯亮蓝g-250分别测定多糖浓度和蛋白质浓度；分级醇沉获得去蛋白分级多糖（以下称为白首乌分级多糖）。

2.2 白首乌分级多糖的免疫调节活性：采用mtt法测定白首乌分级多糖对鸡t淋巴细胞、b淋巴细胞和前体树突状细胞的增殖影响；采用elisa法测定白首乌分级多糖对鸡t淋巴细胞、b淋巴细胞和前体树突状细胞的释放il-2、il-6等细胞因子的影响；采用倒置显微镜观察多糖对树突状细胞成熟的影响。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1 研究方法1.1采用常规提取、三氯乙酸去蛋白和分级醇沉方法得白首乌多糖去蛋白分级多糖。

1.2 测定不同醇沉等级下白首乌多糖对鸡外周血t淋巴细胞、脾脏b淋巴细胞和树突细胞增殖能力的影响。

2 技术路线见附件 3 实验方案3.1 白首乌粗多糖的提取 白首乌烘干粉碎，取粉末200g，乙醇回流脱脂1.5h，热水煎煮2h，离心取上清液，按5g/100ml加入α-淀粉酶和糖化酶，离心取上清加入无水乙醇至含醇量为80%，静置过夜后，抽滤，干燥，得白首乌粗多糖。

4. 研究创新点

通过重复的体外试验，对活性化合物进行药理筛选，能够为明确其药理作用提供依据。

5. 研究计划与进展

2017.10-2017.111) 完成白首乌多糖的提取和分级醇沉2) 完成白首乌多糖浓度测定和蛋白浓度测定2017.11-2017.121) 完成去蛋白、透析、冷冻干燥等一系列工作2018.3-2018.51) 完成细胞试验2) 整理数据，撰写毕业论文