肝纤维化过程中SBP1生命周期变化的研究开题报告

1. 研究目的与意义

肝纤维化（hepatic fibrosis）是一个复杂的、受多因素影响的病理生理过程，是持续性的肝损伤逐渐发展为以肝脏血管和肝小叶结构严重紊乱为主要病理表现的肝硬化的重要病理过程。虽然肝纤维化的过程是可逆的，但目前尚无有效可靠的治疗手段。由此可见，肝硬化是一种严重威胁人类生命健康的临床常见疾病，所以研究肝纤维化的发生机制，以此提高患者生存质量就成为了近几年的热门话题。

硒结合蛋白1（selenium-bindingprotein 1,SBP1）是一种相对分子质量为56000的蛋白质，在多种组织及细胞系中表达，包括心脏、肝脏、肾脏以及肺等。研究表明，硒是一种人体必须的微量元素，与体内生理功能的正常发挥密切相关，在肝纤维化患者的膳食中增加硒的摄入或添加富硒的益生菌能起到抗肝纤维化的作用，而SBP1属于含硒蛋白家族中的一员。因此，SBP1可能是一个具有抗肝纤维化作用的药物靶点，研究SBP1的生成和降解对于预防或者治疗肝纤维化具有重要意义。

2. 研究内容和问题

通过对SBP1生命周期（生成和降解）的研究，从而深入阐述SBP1抗肝纤维化的作用机制。

通过开展有关实验，本人需逐步掌握大鼠的培养、蛋白质的提取、WB及免疫组化等实验技能，了解Western blotting法测定蛋白质的原理以及免疫组化通过显色剂来确定组织细胞内抗原，并对其进行定性定位分析的原理及思路。

3. 设计方案和技术路线

首先将20只大鼠分为正常对照组与模型组，模型组用CCl₄诱导形成肝纤维化，之后在实验的最后一天，全部大鼠于眼后静脉丛取血，取离心后的上层血清，置于-80℃冰箱保存，取完血后，将大鼠处死，解剖取出肝脏；再对大鼠的血清学指标以及大鼠肝脏组织的羟脯氨酸的含量进行测定；之后将大鼠肝脏组织于4%多聚甲醛溶液中固定24h，经过相关实验操作后将肝组织空白切片经苏木精和伊红染色(HE染色)和马宋染色(Masson染色)，于光学显微镜下进行组织病理学分析；最后再通过免疫荧光分析研究SBP1生成和降解水平的变化。通过研究，预计发现SBP1生成减少、并且自噬-溶酶体途径和泛素化-蛋白酶体途径的激活促进了SBP1降解从而降低SBP1蛋白含量。

4. 研究的条件和基础

南通大学药学院拥有细胞实验涉及的Scope A1 正置生物显微镜、XDS-1B 倒置生物显微镜、Tanon 5200 全自动化学发光成像分析系统、Western blot 仪器、激光共聚焦显微镜、DHG-9146A 电热恒温鼓风干燥箱、HB120-S 金属浴、WE-2A 微量振荡器等。南通大学图书馆拥有丰富的电子文献资源，如：SciFinder数据库、Webof Science、ACS 期刊网络版数据库、Elsevier全文数据库、中国知网CNKI等，为文献查阅提供了便利。