牛源多种支原体的分离与鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义：牛呼吸系统疾病是制约国内外养牛业的飞速发展的重要原因之一，该疾病通常由支原体（mycoplasma）、呼吸道合胞体病毒（respiratory syncytial virus, rsv）、多杀性巴氏杆菌（pasteurellamultocida）等病原体单独致病或由多种病原体混合感染引起的[1]。

患病牛在临床上主要表现为发热、咳嗽、流涕等症状。

在欧洲，每年由牛呼吸道疾病造成的经济损失高达1.44~1.92亿欧元，其中由牛源支原体感染引发的经济损失约其中的1/4。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：通过病料采集、实验室分离鉴定，结合分子生物学鉴定，遗传进化的分析，对来自全国9个省份13个牧场疑似患呼吸系统疾病犊牛鼻拭子样本进行支原体的检测分析。

国内对牛源支原体的相关研究极度匮乏，本实验对感染呼吸系统的支原体种类进行了鉴定并分析，确定感染犊牛的支原体种类，为进一步牛呼吸系统疾病的防控与治疗提供新的思路。

研究内容1.支原体的分离、培养与观察将无菌采集的疑似病牛鼻拭子样品冷链运送至南京农业大学猪链球菌病oie参考实验室，离心滤过后分别接种至固体、液体培养基。

3. 研究的方法与方案

实验方案、技术、方法：1.病料的采集：按照1：1000的比例采用随机抽样法，采集全国各地牧场疑似患呼吸系统疾病的犊牛鼻拭子样品。

采用刺激喷嚏法保证样品量，并保证无菌操作，将采集好的鼻拭子样本迅速浸入样本贮存液中，全程冷链运输至南京农业大学猪链球菌oie参考实验室。

2.支原体的分离、培养与观察2.1支原体的分离：吸取样品至ep管中5000rmp离心5min。

4. 研究创新点

根据相关报道，引起牛呼吸系统疾病的支原体有许多种类，但国内外对于感染牛的支原体种类研究极少，多数只停留在单一的牛支原体病原研究上。

本项目旨在探索疑似患呼吸系统疾病犊牛的鼻拭子内存在的支原体种类，为进一步牛呼吸系统疾病的防控与治疗提供新的思路。

5. 研究计划与进展

2017.08-2017.09 查阅文献，熟悉实验室基本操作，确定项目主要内容。

2017.09-2017.12 陆续接收全国各地样品，进行支原体的相关检测。