江苏省进口种牛副结核分枝杆菌和鹿流行性出血热病毒的血清学检测开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题的意义牛副结核病（bovine paratuberculosis,bp）是由副结核分枝杆菌（mycobacterium paratuberculosis,mp）引起的以牛慢性增生性、顽固性肠炎和进行性消瘦为特征的人畜共患传染病[1]。

牛副结核病又称副结核性肠炎或johne病，主要临床症状和病理变化是顽固性腹泻、渐进性消瘦、慢性肉芽肿回肠炎、肠粘膜增厚并形成皱褶[2]。

人类的副结核病又称为克罗恩病（crohns disease），是由食用被该菌污染的牛奶或奶制品而造成的人过敏性肠道症状、溃疡性肠。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标检测该批次进口种牛是否患有牛副结核病和鹿流行性出血热。

2.研究内容运用购自于北京爱德士元亨生物科技有限公司的副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒（美国idexx公司生产）进行牛副结核病检测。

运用法国id-vet公司的ehdv抗体检测试剂盒进行鹿流行性出血热检测。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法按照idexx公司的牛副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒说明书的步骤和要求进行牛副结核病检测。

按照id-vet公司的ehdv抗体检测试剂盒说明书的步骤和要求进行鹿流行性出血热检测。

2.技术路线(1)送检样品处理(2)按照说明书进行实验操作(3)读数判定结果3.实验方案(1)送检样品处理送检的血液样本用移液器取1ml上清加入到1.5ml离心管中，置于离心机中，设置转速为8000 rpm，离心3 min后取出，然后吸取上层血清可以做elisa试验用，下层余留约200μl用于核酸提取。

4. 研究创新点

酶联免疫吸附实验方法是近几年研究学者们比较关注的一个方法，并有可能取代ppd试验与cft试验，用于样品的大规模初筛检测。

目前使用的elisa方法大多为直接elisa方法，其优点是快速、简便、可用于大规模定性检测。

但由于其敏感性较差，所以一般定量检测还需要cft试验与γ- 干扰素检测方法辅助进行。

5. 研究计划与进展

⑴2017年12月在江苏盐城大丰隔离场对一批澳大利亚进口种牛（2543头）进行血液采样。

⑵2018年1月在江苏省出入境检验检疫局检验检疫实验室进行血液样本检测。

⑶2018年2月完成检验得到检测报告并对结果进行分析。