南京地区犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的遗传进化分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题的意义犬细小病毒病（canine parvovirus disease,cpd）是由犬细小病毒（canine parvovirus,cpv）引起的犬及其他食肉性动物的一种急性、高度接触性传染病[1]，以出血性肠炎或非化脓性心肌炎为主要特征，具有感染率高、发病急、病程短和病死率高等特点。

是目前影响我国宠物犬、观赏犬、军犬、警犬等健康的重要传染病之一[2]。

受感染的犬发病率为100%。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的内容样本采集；病毒鉴定及测序；遗传进化分析。

2.研究的目标本研究旨在对采集到的疑似犬细小病毒感染的犬肛门拭子样本进行分离鉴定，从分子水平上，系统地对所确诊的犬细小病毒的变异情况进行分析，为进一步了解犬细小病毒的遗传进化情况和流行病学情况，对以后研究犬细小病毒的基因变异以及更有效的防治犬细小病毒病具有重要参考价值。

2.1样品的采集从南京、上海的宠物医学院收集到至少50个样本，有呕吐、腹泻症状或者确诊为犬细小病毒感染。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法病料的采集；细胞接毒，分离培养，传代分毒；pcr等分子生物学技术扩增片段，检测阳性率并对阳性病料进行测序，以期进一步遗传进化分析。

2.技术路线（见附件）3.实验方案3.1实验材料3.1.1细胞与病料患病犬病料样品为2017年9月10日～2017年12月31日间从南京市周边宠物医院收集的有呕吐、腹泻症状或者确诊为犬细小病毒感染的肛拭子样本。

9-10日龄spf鸡胚。

4. 研究创新点

对犬细小病毒流行毒株VP2蛋白氨基酸序列分析显示目前我国主要城市流行犬细小病毒在VP2蛋白氨基酸序列上存在多种变异株,鉴于这种情况,对更多地区的犬细小病毒抗原变异株的分子监测显得尤为重要。

本项研究将提供犬细小病毒在我国华东地区宠物犬中的分子流行病学调查情况,为进行全面深入的研究CPV分子流行病学,阐明CPV主要的流行株的种类和分布提供基础,对分析生产实践中免疫失败的原因、有针对性地采取相应的防治措施、最终有效控制该病有着重大的实际应用意义。

5. 研究计划与进展

2017年9月10日～2018年4月15日：实习单位实习。

具体收集疑似的犬细小病犬的肛拭子，并记录病犬的各项指标，对应冷冻保存以备实验。

2018年4月16日～2017年5月15日：完成实验室的病毒分离鉴定以及遗传进化分析，记录数据，择写毕业论文。