稻瘟病菌组蛋白乙酰转移酶MoHat1互作蛋白的筛选与功能分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献） 由稻瘟病菌(magnaporthe oryzae)引发的稻瘟病，是水稻上的最重要病害之一，在全世界稻区均有发生，严重威胁世界的粮食及生产安全。

在我国，水稻作为主要的粮食作物，同样遭受稻瘟病的严重挑战。

目前，防治稻瘟病主要以选育和利用抗病品种为主，以化学农药防治为辅，但由于该病原菌小种易变，抗病品种在种植几年后便失去了其利用价值。

3. 研究的方法与方案

(1)采用免疫共沉淀技术筛选与组蛋白乙酰转移酶mohat1相互结合的蛋白：构建mohat1-3xflag融合表达载体，分别转化稻瘟病菌 guy11菌株后筛选获得转化子；提取转化子总蛋白，利用anti-flag m2 beads (sigma-aldrich)进行亲和层析，获得与mohat1相互作用的蛋白质，通过质谱分析蛋白种类，并进一步在稻瘟病菌全序列数据库中鉴定到相对应的编码基因。

(2) 采用同源重组技术对组蛋白乙酰转移酶mohat1的结合蛋白进行功能分析：通过同源重组技术获得上述基因敲除突变体(对于敲除致死基因采用基因沉默技术)，分析突变体的生长、有性生殖、无性繁殖、致病性、抗氧化能力及耐胁迫能力等表型，阐明这些结合蛋白的生物学功能。

项目组已熟练掌握上述技术和方法。

4. 研究创新点

特色或创新之处(1)立意新. 从全基因组范围鉴定致病因子mohat1的结合蛋白，并对其生物学功能进行深入分析。

研究结果对解释稻瘟病菌与致病相关的分子机制具有重要帮助，对寻找控制稻瘟病菌的新的农药靶标位点具有重要的指导价值。

(2)实验方案设计新. 采用免疫共沉淀技术筛选mohat1的结合蛋白；利用质谱分析结合蛋白序列，直接从全基因组数据库中鉴定其对应的编码基因。

5. 研究计划与进展

2017年9月2018年1月1) 构建MoHat1-3xFLAG融合表达载体；2）转化稻瘟病菌Guy11菌株，筛选获得转化子；3）提取转化子总蛋白4）与anti-FLAG M2 beads (Sigma-Aldrich)进行亲和层析； 5）洗脱蛋白，进行质谱测序；6）对蛋白进行种类分析，选取基因进行功能分析。

2018年2月2018年4月1）构建候选基因的敲除载体2）转化Guy11菌株的原生质体,获得敲除突变体3）分析突变体的生物学表型 4）整理总结报告