马来西亚沙巴地区瘿螨分子鉴定研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）瘿螨是一类世界性分布的植食性螨类，在全球广泛地分布，几乎是有陆生植物的地方就有瘿螨的存在。

它们的种类繁多，目前超过4400个种类被报道[1]。

根据最新的且广泛被瘿螨分类学者所接受的分类系统，瘿螨的分类地位为：蛛形纲、蜱螨亚纲、真螨总目、绒螨目（恙螨目）、瘿螨总科[2]。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标：对马来西亚沙巴地区所采集的瘿螨样本进行基于分子序列上的物种鉴定二、研究内容：对马来西亚沙巴地区所采集的瘿螨样本进行物种鉴定，提取单头瘿螨DNA，对指定片段扩增，用Kimura-two-Parameter(K2P)模型估计分化距离(K2P距离)三、拟解决关键问题：1.分子计算出来的分化距离是否达到种间的遗传距离2.不同种间的遗传距离和不同属间的遗传距离跟形态鉴定的是否存在差入

3. 研究的方法与方案

一、研究方法将采集获得的瘿螨样本用dneasy blood tissue kit （qiagen）试剂盒进行单头标本的dna提取；对以下片段进行pcr片段扩增：核28s rrna d2-5 区域、核28s rrna d9-10 区域、核18s rrna 、线粒体coi ；k2p计算遗传阈值二、技术路线通过分子标记技术，提取单头瘿螨样本的dna，并对核28s rrna d2-5 区域、核28s rrna d9-10 区域、核18s rrna 、线粒体coi 四个区域进行片段扩增，对扩增片段进行测序及序列同源比较，最后通过k2p计算遗传阈值，鉴定样本种类三、实验方案1.用dneasy blood tissue kit（qiagen）试剂盒对所采集的单头瘿螨标本的dna进行提取根据dabert et al. 2008对说明书的方法作出修改来提取单头瘿螨的dna。

2.对核28s rrna d2-5区域、核28s rrna d9-10区域、核18s rrna、线粒体coi 这四个片段进行pcr片段扩增，调整退火温度。

3.通过跑胶确定pcr片段扩增是否成功。

4. 研究创新点

1.以往的瘿螨分类研究主要是针对国内地区进行的，本课题主要针对国外即马来西亚沙巴地区的瘿螨样本进行分类鉴别。

2.本课题运用分子标记技术和K2P计算分化距离的方法来鉴定瘿螨样本种类，分子标记技术在瘿螨的分类具有获得容易、特征客观、鉴定精准的特点，而K2P计算遗传阈值可以准确地显示各种群之间的亲缘关系，增加实验的准确性。

5. 研究计划与进展

研究计划1. 2017年8月下旬-2018年4月初：瘿螨鉴定、片段扩增、测序及数据整理；2. 2018年4月上旬-2018年4月中旬：数据分析与调整；3. 2018年4月中旬-2018年4月下旬：毕业论文撰写。

预期进展通过对马来西亚沙巴地区所采集的瘿螨进行了分子手段的鉴定，所确定在马来西亚沙巴地区所采集瘿螨类群的物种情况。