SNARE蛋白FgPep12调控禾谷镰孢菌子囊孢子释放的机制研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.课题的意义小麦是我国重要的麦类作物，其种植面积和产量仅次于水稻，为我国第二大粮食作物[1]。

病害的危害一直严重影响着麦类作物的生产。

我国发生较重的麦类病害有20余种，其中赤霉病、白粉病和纹枯病是长江中下游小麦上的三大病害，以由禾谷镰孢菌(fusarium graminearum)引起的赤霉病的流行频率最高、所致损失大[2]。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标解析snare蛋白fgpep12调控禾谷镰孢菌子囊孢子释放的机制。

2.研究内容选取钙离子通道的相关蛋白(尤其是在高尔基体和液泡之间的蛋白)，分别构建酵母双杂交载体和gfp荧光载体。

验证它们是否和fgpep12以及fgvam7相互作用，另外在突变体中观察这些离子通道蛋白的亚细胞定位是否发生变化。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法利用酵母转化、同源重组、大肠杆菌转化构建离子通道相关蛋白的bd载体，再通过酵母双杂交技术进行其与fgpep12和fgvam7的一对一互作验证，再运用双分子荧光互补(bifc)分析技术进行验证，确保结果可信。

通过peg介导的禾谷镰孢菌原生质体转化，挑选转化子。

2.技术路线和实验方案(1)离子相关通道蛋白与fgpep12和fgvam7互作的验证1>离子通道相关蛋白bd载体构建2>酵母双杂交载体构建，一对一互作验证3>bifc进一步验证互作(2)构建突变体，进行生物学表型分析致病性测定1>通过构建诱导型启动子的载体和原生质体转化技术将已经筛到与fgpep12和fgvam7互作的蛋白对应的基因进行敲除，构建好突变体。

4. 研究创新点

首次通过研究在胞内囊泡运输过程中离子通道相关蛋白是否和FgPep12以及FgVam7互作，在突变体中观察这些离子通道蛋白的亚细胞定位是否发生变化，从而解析SNARE蛋白FgPep12调控禾谷镰孢菌子囊孢子释放的机制。

5. 研究计划与进展

2017.09-2017.12构建离子通道相关蛋白的酵母双杂交载体，一对一验证是否和FgPep12以及FgVam7互作；（已验证获得与FgPep12和FgVam7相互作用的离子通道蛋白。

）2018.01-2018.03构建GFP荧光载体，在突变体中观察亚细胞定位是否发生变化，并研究离子通道相关蛋白与FgPep12和FgVam7三者互作的机理；2018.04-2018.05整理实验数据，撰写毕业论文。