不同信号肽在哺乳动物中对蛋白表达的影响开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

不同信号肽在哺乳动物中对蛋白表达的影响文献综述骆久玲 制药1804 201821126096 指导老师:朱颐申摘要 胶质细胞源性神经营养因子(glial cel lline-derived neurotrophic factor，gdnf)在神经系统的发育、生长、损伤及修复等过程中发挥重要的神经营养作用，在神经系统中的分布广泛，其神经营养活性较高，不仅可以保护多巴胺(da)运动神经元，对于中枢及外周的运动神经元、感觉神经元及交感神经元等多种神经元具有同等的营养作用，在神经系统变性性疾病及缺血性脑血管疾病等治疗中发挥重要作用，已经成为当前神经科学领域研究的热点。

选用不同的信号肽引导gndf受体蛋白在表达系统中分泌表达，通过蛋白纯化对比gndf受体蛋白在hek293细胞中分泌表达量，从而判断不同信号肽对其分泌表达效率影响。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

探究不同信号肽对gdnf受体蛋白表达量的影响研究途径1、真核表达载体构建：将信号肽igk-mouse,igk-human,gdnf受体蛋白三个蛋白序列以及空载体pcdna3.1 送外包公司构建一系列带有不同信号肽的表达载体，构建不同的真核表达质粒，再转入大肠杆菌进行扩大培养，再用碱裂解法提取质粒，用阴离子交换树脂纯化质粒。

操作过程中去内毒素提取重组质粒，并用1％琼脂糖凝胶电泳验证质粒是否合格，用作后续转染试验。

2、将这几种带有不同信号肽的表达质粒通过pei介导的瞬时转染在n293细胞中进行表达，为提高转染效率转染第二天进行再次转染，并且加入增强剂，每天取样计数观察细胞形态结构，密度活力，第四天进行sds-page和western blot图的鉴定，第五天收集分泌的上清，进行纯化鉴定。